Menu

نوقشت رسالة الماجستير للباحثه ( لبنى عامر محمد الطائي ) اختصاص علوم حياة - احياء مجهرية الموسومة (استنباط مؤشر وراثي للمواد الفعالة في النباتات الطبية) هدفت الدراسة إلى استنباط مؤشر وراثي للمواد الفعالة في عدة أنواع من نبات الداتوراDatura sp.   لذا تم عزل الـ DNAالمجيني من أوراق الأنواع المستعملة في الدراسة من هذا النبات, وهي (Daturametel ,Daturainnoxia and Daturastramonium  ), وتم الحصول على كمية من الـ DNA    تراوحت بين (200_900) مايكرو غرام لكل 0.5 غرام من أوراق النبات, وبنقاوة تراوحت بين (1.7 _2) ثم أجريت تفاعلات الـ PCR   ورحلت العينات على هلام الاكاروزوقد كشف عن الحزم باستعمال صبغة الـ Ethidium bromide  .تم استعمال مؤشراتRandom Amplified Polymorphic DNA   (RAPD  )وذلك من أجل استنباط مؤشر وراثي إذ استعمل 51 بادئاً, لم يظهر 17 بادئاً ناتجاً وهي البادئات (OPP-06 ,OPQ-2 ,OPN-07 ,OPY-09, OPH-19 ,OPM-03 ,OPY-03 ,OPP-01, OPH-14, OPG-07, OPI-04, OPK-02, OPM-15 , OPO-19, OPC-19, OPA-06, OPI-06)  . وذلك لعدم إيجاد البادئ لمواقع ارتباط على مجين نبات الداتورا ,و ال 34 بادئاًأظهر نتائج بأختلاف مواقع الارتباط إذ جميع البادئات أعطت حزمة متباينة Polymorphic band  , أظهر البادئ   (OPG-05)Monomorphic band حزمة عامة واحدة فقط main bandو21 بادئاً أظهر حزماً مميزة Unique Bands   اضافة الى الحزمة الرئيسية والبادئات هي OPJ-01)   , OPL-17  , OPR-06  , OPN-16  , OPD-18  , OPW-08   , OPH-19  ,   OPR-10  , OPU-12  , OPJ-05  ,OPO-11  , OPH-14  , OPE-02  , OPK-13  ,   (OPE-20إن هذه البادئات ميزت النوع الأول عن النوعين الثاني والثالث بحزمة مميزه عند حجم جزيئي معين يختلف بأختلاف البادئ المستعمل, البادئ (OPG-02  ) أنتج حزمة ميزت النوع الثالث, والبادئ (  (OPM-01   ميز النوع الثاني عن الأنواع الاخرى, والبادئات OPL-08)  ,OPY-07   ,  (OPL-20أنتج حزم مميزة لكل من النوع الاول والثاني بذي أحجام جزيئي مختلفة تميز كل نوع عن الأخر, والبادئ (OPA-18  ) أنتج حزماً بأحجام جزيئي مختلفة تميز بها كل نوع من الأنواع الثلاثة المدروسة.اما10 بادئاتOPB-10)  ,OPP-04   ,RAPD 4546-041  ,RAPD 4546- 0411  ,OPN-01  ,OPV-20  ,OPW-17  ,OPG-05  ,OPX-01   ,OPP-01  أظهرت حزماً متباينة بين الأنواع إلاأنها لم تتمكن من اظهار حزم مميزة, و 3 بادئات لم تظهر أي ناتج مع نوع معين, وأظهرت حزماً مع الأنواع الأخرى, أذ إن البادئات (OPY-10  , OPZ-08  ) لم تظهر أي حزمة للنوع الأول, والبادئ(  (OPJ-17   لم تظهر حزماً للنوع الثاني, وظهرت حزماً لبقية الأنواع,لقد استثمرت تلك النتائج لدراسة التباين الوراثي بين الأنواع الداخلة في الدراسة.ولقد استعمل مؤشرات الـ   (SSR)  Simple Sequence Repeatedلإيجاد التباين الوراثي للأنواع الثلاثة لنبات الداتوراو قد استعملت ستة بادئات متخصصة مختلفة  اعطى خمسة بادئات وهي (PMT 600   و   PMT 604و   TR11938و TR1700   و   H6H840  )حزمة واحدة ذو حجم جزيئي 1517bp   ،وبادئ واحد(H6H1071  )أعطى حزمة عند الحجم الجزيئي 500 bp  , وهذه النتائج استعملت لتحليل التباين الوراثي بين هذه الأنواع, ومن ثم إيجاد المجموعات الوراثية بالاعتماد على حزم المؤشرات المستخدمة.في هذه الدراسة تم استعمال طريقة الاستخلاص الكحولي لاستخلاص المركبات الفعالة وهي قلويدي الHyosinوScoplaminمن الأنواع الثلاثة لنبات الداتوراDatura  , ومن ثم تحديد نسبة هذه المواد   الفعالة باستخدام جهاز (HPLC  )،إذ وجد ان على نسبة لهذه المادتين في نوعDaturainnoxia   (Hyosin   -   134ملغم . مل-1) و(Scoplamin  -  191.8 ملغم . مل-1),وأن أقل نسبة كانت في نوع Daturastramonium  (Hyosin    33.1ملغم . مل-1)   23.78Scoplamin )   ملغم . مل-1).اما الهدف 1-  قياس تركيز المادة الفعالة وتقدير نسبتها والمقارنة بين الأنواع من حيث كميتها.2-  اعتمادالمؤشرات الجزيئية  الRAPD     والSSR في تحديد التباين الوراثي بين الانواع المدروسة.3- مقارنة نتائج المؤشرات الجزيئية مع المحتوى من المادة الفعالة.4- محاولة الكشف عن وجودعلاقه بين المادة الفعالة الطبية مع مؤشرات وراثية معينةDNA Marker ومقارنتها بين الأصناف المدروسة. الف مبارك للباحثة حصولها على درجة الماجستير في علوم الحياة - احياء مجهرية ونشكر اللجنة العلمية للمناقشة.

lu

lu2

lu1

 

هدفت الدراسة إلى استنباط مؤشر وراثي للمواد الفعالة في عدة أنواع من نبات الداتوراDatura sp.   لذا تم عزل الـ DNAالمجيني من أوراق الأنواع المستعملة في الدراسة من هذا النبات, وهي (Daturametel ,Daturainnoxia and Daturastramonium  ), وتم الحصول على كمية من الـ DNA    تراوحت بين (200_900) مايكرو غرام لكل 0.5 غرام من أوراق النبات, وبنقاوة تراوحت بين (1.7 _2) ثم أجريت تفاعلات الـ PCR   ورحلت العينات على هلام الاكاروزوقد كشف عن الحزم باستعمال صبغة الـ Ethidium bromide  .

       تم استعمال مؤشراتRandom Amplified Polymorphic DNA   (RAPD  )وذلك من أجل استنباط مؤشر وراثي إذ استعمل 51 بادئاً, لم يظهر 17 بادئاً ناتجاً وهي البادئات (OPP-06 ,OPQ-2 ,OPN-07 ,OPY-09, OPH-19 ,OPM-03 ,OPY-03 ,OPP-01, OPH-14, OPG-07, OPI-04, OPK-02, OPM-15 , OPO-19, OPC-19, OPA-06, OPI-06)  . وذلك لعدم إيجاد البادئ لمواقع ارتباط على مجين نبات الداتورا ,و ال 34 بادئاًأظهر نتائج بأختلاف مواقع الارتباط إذ جميع البادئات أعطت حزمة متباينة Polymorphic band  , أظهر البادئ   (OPG-05)Monomorphic bandحزمة عامة واحدة فقط main bandو21 بادئاً أظهر حزماً مميزة Unique Bands   اضافة الى الحزمة الرئيسية والبادئات هي OPJ-01)   , OPL-17  , OPR-06  , OPN-16  , OPD-18  , OPW-08   , OPH-19  ,   OPR-10  , OPU-12  , OPJ-05  ,OPO-11  , OPH-14  , OPE-02  , OPK-13  ,   (OPE-20إن هذه البادئات ميزت النوع الأول عن النوعين الثاني والثالث بحزمة مميزه عند حجم جزيئي معين يختلف بأختلاف البادئ المستعمل, البادئ (OPG-02  ) أنتج حزمة ميزت النوع الثالث, والبادئ (  (OPM-01   ميز النوع الثاني عن الأنواع الاخرى, والبادئات OPL-08)  ,OPY-07   ,  (OPL-20أنتج حزم مميزة لكل من النوع الاول والثاني بذيأحجام جزيئي مختلفة تميز كل نوع عن الأخر, والبادئ (OPA-18  ) أنتج حزماً بأحجام جزيئي مختلفة تميز بها كل نوع من الأنواع الثلاثة المدروسة.

اما10 بادئاتOPB-10)  ,OPP-04   ,RAPD 4546-041  ,RAPD 4546- 0411  ,OPN-01  ,OPV-20  ,OPW-17  ,OPG-05  ,OPX-01   ,OPP-01  )  أظهرت حزماًمتباينة بين الأنواع إلاأنها لم تتمكن من اظهار حزم مميزة, و 3 بادئات لم تظهر أي ناتج مع نوع معين, وأظهرت حزماً مع الأنواع الأخرى, أذ إن البادئات (OPY-10  , OPZ-08  ) لم تظهر أي حزمة للنوع الأول, والبادئ(  (OPJ-17   لم تظهر حزماً للنوع الثاني, وظهرت حزماً لبقية الأنواع,لقد استثمرت تلك النتائج لدراسة التباين الوراثي بين الأنواع الداخلة في الدراسة. 

 ولقد استعمل مؤشرات الـ   (SSR)  Simple Sequence Repeatedلإيجاد التباين الوراثي للأنواع الثلاثة لنبات الداتوراوقد استعملت ستة بادئات متخصصة مختلفة  اعطى خمسة بادئات وهي (PMT 600   و   PMT 604و   TR11938و TR1700   و   H6H840  )حزمة واحدة ذو حجم جزيئي 1517bp   ،وبادئ واحد(H6H1071  )أعطى حزمة عند الحجم الجزيئي 500 bp  , وهذه النتائج استعملت لتحليل التباين الوراثي بين هذه الأنواع, ومن ثم إيجاد المجموعات الوراثية بالاعتماد على حزم المؤشرات المستخدمة. 

·         الجزءالكيميائي :

        فيهذهالدراسةتماستعمالطريقةالاستخلاصالكحوليلاستخلاصالمركباتالفعالة وهي قلويدي الHyosinوScoplaminمن الأنواع الثلاثة لنبات الداتوراDatura  , ومنثمتحديدنسبةهذهالموادالفعالةباستخدامجهاز (HPLC  )،إذوجدأنأعلىنسبةلهذهالمادتين في نوعDaturainnoxia   (Hyosin   -   134ملغم . مل-1) و(Scoplamin  -  191.8 ملغم . مل-1),وأنأقلنسبةكانتفينوعDaturastramonium  (Hyosin    33.1ملغم . مل-1)   23.78-  Scoplamin )   ملغم . مل-1). 

والأهدافالتيعدمنأجلهاوالتياهمها:

1-               قياس تركيز المادة الفعالة وتقدير نسبتها والمقارنة بين الأنواع من حيث كميتها. 

2-               اعتمادالمؤشراتالجزيئيةالRAPD     والSSRفيتحديدالتباينالوراثيبين الانواع المدروسة. 

3-               مقارنة نتائج المؤشرات الجزيئية مع المحتوى من المادة الفعالة. 

4-                   محاولةالكشفعنوجودعلاقهبينالمادة الفعالةالطبيةمعمؤشراتوراثيةمعينةDNA Markerومقارنتهابينالأصنافالمدروسة. 

 

 

Go to top